Ispitivanje imunomodulatornih efekata alfakalcidola kod pacijenata sa aktivnim reumatoidnim artritisom
Immunomodulatory effect of alfacalcidol in patients with active rheumatoid arthritis
Докторанд
Živanović Radnić, Tatjana V.Ментор
Šefik-Bukilica, MirjanaЧланови комисије
Vojinović, JelenaDamjanov, Nemanja
Marković, Ivanka
Arsenović-Ranin, Nevena
Метаподаци
Приказ свих података о дисертацијиСажетак
Poslednjih godina, otkriće ekspresije vitamin-D receptora (VDR) u ćelijama imunskog
sistema i činjenica da neke od ovih ćelija i produkuju D hormon, govore u prilog
postojanja imunomodulatorne uloge vitamina D u organizmu. Sintetski analog
hormona D, alfakalcidol, se koristi u prevenciji i lečenju osteoporoze ali nekoliko
studija ukazalo je na njegov mogući terapijski potencijal i u reumatoidnom artritisu.
U cilju proučavanja delovanja alfakalcidola primenjeni su komplementarni in vivo, in
vitro i ex vivo pristupi koji su podrazumevali ispitivanje imunomodulatornih efekata
alfakalcidola kod zdravih kontrola i kod bolesnika sa aktivnim reumatoidnim
artritisom (RA). U ispitivanje je, uključeno 16 bolesnika sa RA, oba pola, sa aktivnom
bolešću (DAS 28 (SE) >3.2, uprkos terapiji lekovima koji menjaju tok bolesti
(LMTB) tokom najmanje mesec dana i 20 zdravih dobrovoljaca (iste distribucije pola
i godina starosti) - kontrolna grupa zdravih. Bolesnici sa RA su pored svoje redovne
LMTB terapij...e, dobijali svakodnevno alfakalcidol (2mcg/dan), u trajanju od 12
nedelja. Uzorci periferne krvi su uzimani zdravim kontrolama i bolesnicima pre i
posle 12 nedelja terapije alfakalcidolom. Iz uzoraka periferne krvi zdravih kontrola i
bolesnika sa RA izolovane su mononuklearne ćelije periferne krvi (MĆPK) koje su
kultivisane in vitro. U kulturama MĆPK zdravih kontrola i bolesnika sa aktivnim RA
pre terapije alfakalcidolom ispitivan je efekat in vitro suplementacije alfakalcidolom,
kalcitriolom, metilprednizolonom i istovremeno alfakalcidol/metilprednizolon
suplementacijom na stimulisanu produkciju citokina. Iz supernatanata MĆPK ćelijske
kulture određivani su nivoi citokina IL-6, IL-17, IL-21, TNF-α, IL-4, IL-10, TGF-β i
IFN-γ ELISA metodom. U kulturama MĆPK izolovanih iz periferne krvi bolesnika sa
RA pre i posle dvanaestonedeljne terapije sa alfakalcidolom i zdravih kontrola merena
je stimulisana produkcija citokina ELISA metodom i analizirano prisustvo reaktivnih
kiseoničnih jedinjenja i potencijal mitohondrijalne membrane limfocita metodom
protocne citofluorimetrije. U uzorcima periferne krvi odredjivani su: vrednosti
serumskog 25(OH)D metodom elektrohemiluminiscencije, parametri zapaljenja (SE
eritrocita i serumska koncentracija C-reaktivnog proteina), parametri aktivnosti
bolesti (kompozitni indeks DAS 28), vrednosti serumskih citokina ELISA metodom,
parametri oksidativnog stresa (aktivnost antioksidativnih enzima SOD, CAT i GPx
kao i nivo MDA u plazmi) spektrofotometrijskom metodom...
The discovery of vitamin D receptor (VDR) expression in the cells of the immune
system and the fact that some of these cells produce D hormone indicate
immunomodulatory role of vitamin D. Hormone D synthetic analog, alfacalcidol, is
used in the prevention and treatment of osteoporosis. Several recent studies pointed to
its possible therapeutic potential in rheumatoid arthritis. In order to study alfacalcidol
effects, we applied complementary in vivo, in vitro and ex vivo approach that
included testing the immunomodulatory effects of alfacalcidol in healthy controls and
patients with active rheumatoid arthritis. In sixteen patients with active RA (DAS
28(SE) score >3.2) of both sexes, alphacalcidol (2μg/day) was added to previously
applied therapy (stable dose of methotrexate, without any steroid therapy) during
three months. Twenty healthy volunteers (same distribution gender and age) were
control group. Peripheral blood samples were taken from healthy controls once at the
beginning of... the study, and from patients before and after 12 weeks of alphacalcidol
therapy. Patients and healthy controls peripheral blood mononuclear cells (PBMC)
were isolated and cultured in vitro. In PBMC cultures of healthy controls and patients
with active RA, In vitro effects of supplementation with alfacalcidol, calcitriol,
methylprednisolone and cotreatment with alfacalcidol/methylprednisolone were
studied. Stimulated production of cytokines IL-6, IL-17, IL-21, TNF-α, IL-4, IL-10,
TGF-β i IFN-γ were determined by ELISA. In PBMC cultures isolated from
peripheral blood of patients with RA before and after twelve weeks of treatment with
alfacalcidol and healthy controls, stimulated cytokine production by ELISA was
measured and the presence of reactive oxygen compounds and mitochondrial
membrane potential of lymphocytes were analyzed by flow cytometry. From the
peripheral blood samples were determined: serum 25(OH)D by
electrochemiluminiscence method, parameters of inflammation (erythrocyte SE and
serum C-reactive protein), the parameters of disease activity (DAS composite index
28), serum cytokines by ELISA method and the parameters of oxidative stress
(antioxidant enzymes SOD, CAT and GPx and GSH level in the lysate of erythrocytes
and plasma levels of MDA) by spectrophotometric method...
Факултет:
Универзитет у Београду, Фармацеутски факултетДатум одбране:
20-09-2016Пројекти:
- Модулација сигналних путева који контролишу интрацелуларни енергетски баланс у терапији тумора и неуро-имуно-ендокриних поремећаја (RS-MESTD-Integrated and Interdisciplinary Research (IIR or III)-41025)