Karakterizacija ektoenzima koji hidrolizuju vanćelijski ATP i ADP u uterusu pacova i in vitro uticaj kadmijuma, žive i bakra na aktivnost enzima
Characterization of ectoenzymes that hydrolyze extracellular ATP and ADP in rat uterus and in vitro effects of cadmium, mercury and copper on enzyme activity
Doktorand
Milošević, Maja S.Mentor
Vrvić, MiroslavČlanovi komisije
Horvat, AnicaSpasić, Mihajlo B.
Nikolić, Milan R.
Polović, Natalija
Metapodaci
Prikaz svih podataka o disertacijiSažetak
ATP i drugi purinski nukleotidi su parakrini signalni molekuli koji vezivanjem
za purinske receptore (P1 i P2) na ćelijskoj membrani učestvuju u kontroli
kontrakcija i modulaciji imunog odgovora u uterusu sisara. Poremećaji
kontraktilnosti uterusa mogu imati važnu ulogu u nastanku neplodnosti, dismenoreje
i prevremenog porođaja. U ovom radu ispitano je prisustvo i kinetičke osobine
ektoenzima koji hidrolizuju vanćelijski ATP i ADP u uterusu pacova (Wistar albino).
Takođe, ispitan je in vitro uticaj teških metala (kadmijuma, žive i bakra) kao i
zaštitni efekat EDTA i L-cisteina na aktivnost ektoenzima u prisustvu jona metala.
Rezultati ove studije pokazali su da hidrolizu vanćelijskog ATP i ADP u
uterusu pacova katalizuju enzimi iz familije E-NTPDaza. To potvrđuju rezultati:
neosetljivosti na inhibitore drugih membranskih ATPaza (oligomicin, ouabain,
teofiln i levamisol); pH optimum za maksimalnu aktivnost enzima na alkalnom pH
(8.0-8.5) za oba supstrata; zavisnost enzimske aktivnosti o...d dvovalentnih jona i
inhibicija suraminom. Izmerana aktivnost E-NTPDaza u uterusu je veoma visoka u
odnosu na ostala tkiva pacova, što se vidi iz dobijenih vrednosti kinetičkih
parametara za hidrolizu ATP (Vmax
(app)=3.973±0.280 μmol Pi/min/mg,
Km
(app)=0.506±0.062 mM), odnosno ADP (Vmax
(app)=2.854±0.080 μmol Pi/min/mg,
Km
(app)=0.639±0.031 mM). Slične Km vrednosti za hidrolizu ATP i ADP, odnos
početnih brzina hidrolize ATP/ADP (1:0.57), Chevillard-ova kriva kompeticije ATP
i ADP, kao i inhibicija milimolarnim koncentracijama natrijum-azida (5-10 mM)
ukazuju da je E-NTPDaza 1 dominantni enzim koji hidrolizuje vanćelijske
nukleotide u uterusu pacova. RT-PCR i Western blot analizom pokazana je genska i
proteinska ekspresija NTPDaze 1 i 2 u uterusu pacova.
U daljem toku istraživanja ispitan je efekat i mehanizma delovanja
dvovalentnih jona kadmijuma, žive(II) i bakra(II) na aktivnost E-NTPDaza iz uterusa pacova...
ATP and other purine nucleotides are paracrine signaling molecules. Acting via
purine receptors (P1 and P2) on the cell membrane, extracellular nucleotides
participate in the control of contraction and modulation of the immune response in
mammalian uterus. Disorder of uterine contractility may play an important role in the
development of infertility, dysmenorrhea and premature labor. In this study, we
examined the presence and kinetic properties of ectoenzymes that hydrolyze
extracellular ATP and ADP in rat uterus (Wistar albino). Also, effects of heavy metal
ions (cadmium, mercury, and copper) on the activity of ectoenzymes from rat uterus
were studied in vitro, in the absence and presence of EDTA and L-cysteine.
This study showed that hydrolysis of extracellular ATP and ADP in rat uterus
is catalyzed by enzymes classified as the E-NTPDase family. The following results
confirmed common properties characteristic for E-NTPDases: insensitivity to
inhibitors of other membrane ATPase (olig...omycin, ouabain, theophylline and
levamisole), an alkaline pH optimum for both substrates (8.0-8.5), divalent cations
dependence and significant inhibition by suramine. E-NTPDase activity in rat uterus
appeared to be very high compared to other rat tissues. The apparent Km values were
0.506±0.062 and 0.639±0.031 mM, with a calculated Vmax
(app) of 3.973±0.280 and
2.854±0.080 μmol Pi/min/mg for ATP and ADP, respectively. According to similar
apparent Km values for both substrates, the ATP/ADP hydrolysis ratio (1:0:57),
Chevillard competition plot, and inhibition by high milimolar concentrations of
sodium-azide (5-10 mM), E-NTPDase 1 is dominant ATP/ADP hydrolyzing enzyme
in uterine cell membranes. RT-PCR and Western blot analysis revealed gene and
protein expression of NTPDaze 1 and 2 in rat uterus.
In the further course of research, the effects and mechanism of action of
divalent ions (mercury, cadmium and copper) on the activity of E-NTPDases from
rat uterus were examined...
Fakultet:
Универзитет у Београду, Хемијски факултетDatum odbrane:
30-09-2014Projekti:
- Ćelijska i molekulska osnova neuroinflamacije: potencijala ciljna mesta za translacionu medicinu i terapiju (RS-MESTD-Integrated and Interdisciplinary Research (IIR or III)-41014)
- Molekularni mehanizmi patofizioloških promena u ćelijama centralnog nervnog sistema i perifernog tkiva kod sisara (RS-MESTD-Basic Research (BR or ON)-173044)