Molekularno-genetička identifikacija tripanozome Lotmaria passim Schwarz, 2014 i analiza njenih efekata na zdravlje pčelinjih zajednica i ekonomske efekte u pčelarstvu
Molecular genetic identification of Lotmaria passim Schwarz, 2014 trypanosome and the analysis of its impact on the health of bee colonies and economic effects in apiculture.
Докторанд
Vejnović, BranislavМентор
Stevanović, JevrosimaMirilović, Milorad
Чланови комисије
Stanimirović, ZoranAleksić, Nevenka
Ćirković, Dragan
Метаподаци
Приказ свих података о дисертацијиСажетак
Zbog nepostojanja molekularne metode za determinaciju vrsta pčelinjih
tripanozoma Crithidia mellificae i Lotmaria passim bez naknadnog sekvencioniranja,
definisan je cilј ovog rada, a to je molekularna identifikacija tripanozome L. passim i
ispitivanje njenog uticaja na zdravlјe pčelinjih zajednica i ekonomske efekte u
pčelastvu. Razvijeni su specijes-specifični prajmeri za PCR detekciju C. mellificae i L.
passim kao i real-time PCR metoda za detekciju i kvantifikaciju L. passim. Uzorci pčela
koji su sakupljani u Srbiji u devetogodišnjem periodu (2007-2015) retrospektivno su
analizirani kako bi se utvrdila prevalencija ovog eukariotskog parazita molekulanrnom
analizom DNA. Kako bi se utvrdila godišnja dinamika L. passim, njen uticaj na
oksidativni stres, kao i na ekonomsku dobit formirane su dve grupe košnica. Istraživanje
je sprovedeno na ukupno dvadeset Langstroth košnica, 10 košnica koje su bile L.
passim-pozitivne i 10 košnica koje su bile L. passim-negativne, a koje su ...se nalazile na
dva različita pčelinjaka. Tokom trajanja eksperimenta (od marta 2016. do marta 2017.
godine) svakog meseca izuzev zimskih meseci (oktobar-februar) iz svake košnice je
uzorkovano najmanje 120 živih odraslih pčela sa leta košnice (za detekciju i
kvantifikaciju L. passim i Nosema spp), a u junu i septembru 20 živih odraslih pčela za
potrebe analize parametara oksidativnog stresa.
Razvijeni su specijes-specifični prajmeri za PCR detekciju tripanozoma vrste C.
mellificae i L. passim, koji su validirani i u uslovima mešovite infekcije, kao i infekcije
tripanozomom bumbara Crithidia bombi. Infekcija sa N. apis i N. ceranaesu analizirane
korišćenjem PCR. Tehnikom real-time PCR je utvrđen nivo infekcije vrstom L. passim
kod L. passim-pozitivnih društva, dok je brojanjem spora određen nivo infekcije sa N.
ceranae u svim društvima.
Analizirani su uzorci pčela iz 162 društva (18 iz svake godine), koji su
prikupljeni sa 57 različitih lokacija. L. passim je detektovana u uzorcima koji su poticali
iz svake godine i kod prosečno 62,3% (godišnja prevalencija od 38,9% do 83,3%)...
Due to the absence of molecular methods intended for species-specific
identification of bee trypanosomes Crithidia mellificae and Lotmaria passim without
further sequencing, the goal of this thesis has been defined: molecular identification of
L. passim trypanosome and the research into its impact on the colony health and
economic effects in apiculture. Species-specific primers for PCR detection of C.
mellificae and L. passim as well as a real-time PCR method for the detection and
quantification of L. passim were developed. Archival bee samples collected in Serbia
during a nine-year period (2007-2015) were analysed retrospectively to assess the
prevalence of this eukaryotic parasite by molecular DNA analysis. To determine the
annual dynamic of L. passim infection, and its influence on oxidative stress and the
economic income two apiaries were chosen. Ten hives from each made up the two
experimental groups, the L. passim-positive from the one and the L. passim-negative
from ...another. During the experimental period (from March 2016 to March 2017) each
month with the exception of winter months (October-February) from every hive 120
live adult bees were collected from the hive entrance for the detection and quantification
of L. passim and Nosema spp. In addition, in June and September 20 live adult bees
were collected in the same manner for oxidative stress analysis.
Species-specific primers for PCR detection of the two trypanosomatids, C.
mellificae and L. passim, were developed and validated for target specificity under
single and mixed-species conditions as well as against the bumblebee trypanosomatid
Crithidia bombi. Infections with N. apis and N. ceranae were analysed using the PCR
assay. Infection levels with L. passim in L. passim-positive colonies were detected with
the real-time PCR, and the N. ceranae infection level by spore counting in all of the
colonies.
A total of 162 colonies (18 originating from each year), collected from 57
locations were analysed. L. passim was detected in samples provided each year in 62.3%
of samples (ranging between 38.9% and 83.3%)...
Факултет:
Универзитет у Београду, Факултет ветеринарске медицинеДатум одбране:
14-03-2019Пројекти:
- Молекуларно-генетичка и екофизиолошка истраживања у заштити аутохтоних анималних генетичких ресурса, очувању добробити, здравља и репродукције гајених животиња и производњи безбедне хране (RS-MESTD-Integrated and Interdisciplinary Research (IIR or III)-46002)