Molekularno-genetička detekcija i identifikacija uzročnika mikrosporidijalnih i virusnih infekcija zastupljenih kod pčelinjih društava na teritoriji Srbije

Abstract

Primena molekularno – genetičkih metoda zauzima značajno mesto u dijagnostici oboljenja kod životinja izazvanih delovanjem različitih vrsta uzročnika. Ove metode, uglavnom zasnovane na lančanoj reakciji polimeraze (PCR), karakteriše zadovoljavajuća brzina izvođenja i visok stepen specifičnosti, odnosno osetljivosti. Mikrosporidije pčela, Nosema ceranae i Nosema apis, ispoljavanjem patogenog efekta na individualnom nivou, mogu dovesti do gubitka čitavih pčelinjih društava. Umnožavanjem mikrosporidijalne DNK, PCR tehnika omogućava istovremeno utvrđivanje prisustva i identifikaciju uzročnika u uzorku u kojem mikroskopskim pregledom nije utvrđeno prisustvo spora. Pojedine vrste virusa mogu biti uzročnici poremećaja zdravstvenog stanja pčela. Među najznačajnije viruse koji mogu naneti štete pčelinjim društvima ubrajaju se virus deformisanih krila (DWV), virus akutne paralize pčela (ABPV), virus mešinastog legla (SBV) i virus hronične paralize pčela (CBPV). Pomenuti virusi često izazivaju inaparentne infekcije koje, usled delovanja nespecifičnih faktora i drugih patogena, za kratko vreme mogu prerasti u klinički manifestne i dovesti do gubitka pčelinjih društava. Primenom tehnike Real-time RT-PCR bazirane na TaqMan probama, moguće je otkriti prisustvo virusne RNK koja se nalazi u niskoj koncentraciji u ispitanom uzorku. Ovo ima veliki značaj u dijagnostici virusnih infekcija kod pčelinjih društava koja ne ispoljavaju kliničke simptoma bolesti. Cilј ove doktorske disertacije je da se primenom molekularno-genetičkih metoda izvrši detekcija i identifikacija uzročnika četiri najčešće virusne infekcije (DWV, ABPV, SBV i CBPV) zastuplјene kod pčelinjih zajednica različite jačine koje potiču iz različitih krajeva Srbije...

Molecular diagnostic in modern veterinary medicine plays an important role in diagnosis of animal health disorders. Major advantages of molecular diagnostic are quickness and high specificity and sensitivity in detection and identification of infectious and non-infectious agents. Microsporidia, Nosema ceranae and Nosema apis, as a consequence of pathogenic effects in individual bees may provoke losses of entire honey bee colonies. Amplification of microsporidial DNA using PCR allows simultaneous detection and identification of Nosema species in samples that appeared to be free from Nosema spores after microscopic examination.Honey bee viruses may have a significant impact on health status of honey bee colonies. Most common viruses considered to be able to cause damage to bee colonies include Deformed wing virus (DWV), Chronic bee paralysis virus (CBPV), Acute bee paralysis virus (ABPV) and Sacbrood virus (SBV). These viruses may exist in colonies in low infectious titres causing asymptomatic infection that due to the negative impact of non-specific factors and/or other pathogens may develop in to covert infection and lead to colony loss.High specificity and sensitivity of Real-time RT-PCR method based on TaqMan probes enables detection of very small amounts of viral RNA in bee samples originated from asymptomatic colonies which is advantage of this method compared to end point PCR. The aim of this work is detection and identification of four most common viruses (DWV, ABPV, SBV and CBPV) in honey bee colonies of different strength originated from different Serbian regions...