Analiza alteracija onkogena i tumorsupresornih gena u histološki negativnim marginama planocelularnih karcinoma usne duplje

Abstract

Karcinom pločasto slojevitog epitela usne duplje - oralni planocelularni karcinom (OPK) je invazivna patološka lezija epitela različitog stepena skvamozne diferencijacije koji se odlikuje ranim i ekstenzivnim metastazama. Ključni faktor za tok bolesti i ishod hirurškog lečenja kod pacijenata sa planocelularnim karcinomom glave i vrata je pravovremena dijagnoza i adekvatno hirurško lečenje. Postoje brojni dokazi da je prisustvo malignih ćelija u hirurškim marginama u direktnoj vezi sa povećanim rizikom za razvoj recidiva bolesti kao i manjom stopom preživljavanja. Za sada ne postoje jedinstveni kriterijumi koji definišu šta je „čista“ odnosno histološki negativna hirurška margina kod OPK. U literaturi ima mnogo kontradiktornih podataka vezanih za uticaj statusa margina na ishod hirurškog lečenja zbog ograničenog dometa histopatološke analize. Predmet ove studije je molekularno-genetička analiza histološki negativnih margina OPK, kao potencijalno relevantan parametar sa stanovišta procene ishoda hirurške intervencije. Istraživanje je obuhvatilo analizu gena TP53, H-ras, c-myc i c-erb B2 koji imaju značajnu ulogu u malignoj transformaciji ćelija. Nakon histopatološke verifikacije da u graničnom tkivu nema prodora malignih ćelija, pristupilo se daljoj molekularno genetičkoj analizi graničnog tkiva. Studijom je obuhvaćeno 50 pacijenata. Skrining tačkastih mutacija u egzonima 5-7 TP53gena i H- ras gena, urađen je pomoću PCR-SSCP metode (lančana reakcija polimeraze i konformacioni polimorfizam jednolančane DNK) a uzorci koji su pokazali izmenjenu elektroforetsku pokretljivost su (komercijalno) sekvencirani. Dobijene sekvence upoređivane su sa bazom podataka NCBI GeneBank. Za analizu genske amplifikacije (c-myc i c-erbB2) korišćena je metoda diferencijalnog PCR-a, kao i metoda relativne kvantifikacije na real-time PCR aparatu, upotrebom kontrolnog («house-keeping»)gena...