Ispitivanje prisustva i serotipske pripadnosti vrste Streptococcus suis u materijalima poreklom od svinja

Abstract

Cilj ovog ispitivanja je bio da se ustanovi prisustvo S. suis na nekim farmama i klanicama svinja u Republici Srbiji, definišu biohemijske osobine izolovanih sojeva, utvrdi njihova serotipska pripadnost i ispita njihova osetljivost na antibiotike. Poznato je da se S. suis nalazi kao normalan stanovnik respiratornog sistema svinja, najčešće tonzila i nosnih šupljina, a često se može izolovati i iz genitalnog i gastrointestinalnog sistema. Klinički zdrave svinje predstavljaju glavni rezervoar uzročnika i najznačajniju kariku u epidemiologiji infekcije kod ljudi. Iako se smatra uglavnom patogenom svinja, S. suis je do sada izolovan kao uzročnik infekcija kod različitih drugih vrsta sisara (goveda, mačaka, ovaca) i ptica. Infekcije kod ljudi izazvane S. suis smatrane su sporadičnim i bile su uglavnom vezane za ljude koji dolaze u kontakt sa svinjama i njihovim proizvodima. Međutim, 2005. godine u Kini je izbila epidemija izazvana S. suis kada je obolelo više od 200 ljudi, a kod skoro 20% obolelih bolest se završila fatalno. Ova epidemija je potpuno promenila shvatanje o opasnosti ovog patogena za zdravlje ljudi. Veterinarske dijagnostičke laboratorije obično lako identifikuju S. suis upotrebom malog broja biohemijskih testova, naročito ukoliko su ispitivani uzorci poreklom od obolelih svinja. Međutim, smatra se da neki sojevi (i/ili serotipovi) S. suis mogu biti pogrešno identifikovani komercijalnim kitovima, zbog čega serotipizacija, koja se inače koristi i u rutinskoj dijagnostičkoj proceduri predstavlja jednu od sigurnih dijagnostičkih metoda Osetljivost na antibiotike sojeva S. suis u zemljama u kojima je ispitivana uglavnom je zavisila od antibiotika koji su korišćeni u lečenju svinja. Za ovo ispitivanje korišćeni su brisevi nazofaringealnih tonzila prasadi i svinja, nosnih šupljina prasadi, ali i brisevi organa uginule prasadi, brisevi sa trupova zaklanih svinja i brisevi sa noža za evisceraciju organa na klanici. Svi uzorci su transportovani u tripton soja bujonu u roku od 2 časa od uzorkovanja. Za izolaciju su korišćene čvrste i tečne hranljive podloge (Columbia agar sa dodatkom 5% ovčije krvi, moždano srčana infuzija sa dodatkom 6,5% NaCl, tripton soja bujon, eskulin bujon, andrade ugljeno hidratni bujon sa indikatorom i trehalozom ili salicinom). Za identifikaciju izolovanih bakterija korišćeni su klasični i komercijalni testovi API 20 Strep i rapid ID32 STREP (bioMérieux, Francuska), a definitivna identifikacija sojeva S. suis obavljena je serološkom tipizacijom sa serumima specifičnim za kapsularne antigene (1-35) S. suis, takozvanim Neufeld testom (Quellung reakcija). Ispitivanje osetljivosti sojeva na antimikrobne lekove S. suis izvedeno je disk-difuzionom metodom po Kirby - Bauer-u na Mueller Hinton agaru sa 5% ovčije krvi, korišćenjem diskova proizvođača BD diagnostics prema uputstvu proizvođača. Od ukupno 226 uzoraka izolovana su i serotipizirana 34 soja. Serotip 2 S. suis je ustanovljen u 67.7% slučajeva, a serotipovi 7, 9 i 1 su izolovani u daleko manjim procentima (17.6%, 8.8% i 5.9%). Kod svih sojeva Streptococcus suis izolovanih od svinja sa nekoliko farmi i klanica u Republici Srbiji ustanovljena je visoka osetljivost na cefalosporinske antibiotike, vankomicin i hloramfenikol (100%), manja na penicilin, amoksicilin, ciprofloksacin, eritromicin i azitromicin (94,1%), veoma niska na kombinaciju sulfametoksazola i trimetoprima (5,9%), dok je kod svih sojeva utvrđena rezistencija na tetraciklin, klindamicin i linkomicin.

The aim of this study was to establish the presence of S. suis on some pig farms in the Republic of Serbia, then, to define their biochemical profiles, determine their serotype affiliation and test antimicrobial susceptibility of isolated serotypes. It is known that S. suis is a normal inhabitant of the respiratory system of pigs, mostly of the tonsils and nasal cavities, and can often be isolated from the genital and gastrointestinal system. Clinically healthy pigs are a major reservoir of pathogens and the most important link in the epidemiology of infection in humans. Although generally considered a pathogen for pigs, S. suis has been isolated as the cause of infection in a variety of other mammal species (cattle, cats, sheep) and birds. Infections in humans caused by S. suis were considered sporadic and were mostly related to people who come in contact with pigs and their products. However, in year 2005 the outbreak in China caused by S. suis affected more than 200 people, with almost 20% of patients with the disease ending fatally. This epidemic has completely changed the perception of the danger of this pathogen to human health. Veterinary diagnostic laboratories usually easily identify S. suis using a small number of biochemical tests, especially if the samples originate from diseased pigs. However, it is considered that some S. suis strains (and/or serotypes) may be incorrectly identified by commercial kits, thus making serotyping (normally used in routine diagnostic procedures), one of the safest diagnostic procedures. For this test we used nasopharyngeal swabs of pigs and pig tonsils, nasal cavities of piglets, and swabs of dead pigs, swabs from the carcasses of slaughtered pigs and swabs from the evisceration knife after slaughter. All samples were transported in tryptone soy broth within 2 hours of sampling. For isolation were used solid and liquid media (Colombia agar with 5% sheep blood added, brain heart infusion with 6.5% NaCl added, tryptone soy broth, esculin broth, andrade’s carbohydrate broth with indicator and trechalose or salicine). For the identification of the isolated bacteria classical and commercial tests API 20 Strep and Rapid ID32 STREP (bioMérieux, France) were used and for the definitive identification of strains of S. suis serological typing was performed with antisera specific for capsular antigens (1-35) the so-called Neufeld test (Quellung reaction). Antimicrobial susceptibillity testing was performed by disc-diffusion (Kirby-Bauer) method on Mueller Hinton agar with 5% sheep blood using BD diagnostics antimicrobial susceptibility test discs according to manufacturers instructions. From 226 collected samples, 34 strains of S. suis have been isolated. S. suis serotype 2 has been isolated in 67,7% of cases, while serotypes 7, 9 and 1 have been isolated much less frequently (17.6%, 8.8% and 5.9%, respectively ). All S. suis strains isolated from some pig farms and slaughterhouses in Republic of Serbia showed high antimicrobial susceptibility to cephalosporins, vancomycin and chloramphenicol (100%), little less susceptibility to penicillin, amoxicillin, ciprofloxacin, erythromycin and azythromycin (94,1%), very low susceptibility was observed against sulfamethoxazole and trimethoprim, while all strains were resistant to tetracycline, clindamycin and lincomycin.