Analiza prirode rezistencije na hinolone i molekularna tipizacija odabranih serotipova Salmonella enterica subspecies enterica
Analysis of nature of resistance to quinolones and molecular typing of selected serotypes of Salmonella enterica subspecies enterica
Author
Kozoderović, Gordana V.Mentor
Milošević, VesnaCommittee members
Lozo, Jelena
Velhner, Maja
Golić, Nataša

Strahinić, Ivana

Metadata
Show full item recordAbstract
Salmoneloze spadaju među najznačajnije zoonoze u svetu. S obzirom da se ljudi
zaražavaju najčešće putem konzumacije hrane životinjskog porekla, nadzor nad
salmonelama neophodan je u svakom stadijumu proizvodnje hrane od farme do viljuške.
Širenje rezistencije na hinolone među salmonelama predstavlja veliki javno zdravstveni
problem zbog uticaja na lečenje ljudi i životinja. Cilj istraživanja je bio da se ispita
mogućnost brze i efikasne tipizacije Salmonella enterica subspecies enterica serotip
Enteritidis (S. Enteritidis) kao najčešćeg serotipa kod ljudi i učestalost i molekularni
mehanizmi rezistencije na hinolone kod salmonela. U kolekciji izolata S. Enteritidis
poreklom od ljudi, pilića i iz namirnica živinskog porekla, kombinacijom RAPD-PCR
tipizacije sa četiri prajmera, rezistotipizacije i polimorfizma mutacija u regionu gyrA
gena koji kodira rezistenciju na hinolone (QRDR), diskriminisano je 22 genetičke grupe
sa indeksom diskriminacije 0.828. Svi izolati bili su visoko srodni, ...a tipizacija je
dokazala nasumičnu raspoređenost tipova u sve tri kategorije izolata, odnosno
cirkulaciju sojeva kroz razne stadijume lanca ishrane. RAPD-PCR tipizacija uspešno je
izdvojila epidemijski soj među tri izolata S. Enteritidis iz jednog restorana brze hrane.
Analizom uzoraka iz fabrike biskvita ustanovljena je kontaminacija sa najmanje četiri
soja S. Enteritidis i povezanost serotipa Enteritidis sa jajima kao izvorom kontaminacije.
Analizom većeg uzorka izolata poreklom od namirnica i ljudi sa teritorije Južnobačkog
okruga u šestogodišnjem periodu ustanovljena je mala učestalost rezistencije S.
Enteritidis na antibiotike, retka pojava višestruke rezistencije na antibiotike i mala
učestalost rezistencije na hinolone (2.9%). Nađena su tri tipa mutacija odgovornih za
rezistenciju na hinolone u QRDR regionu: Asp87Asn, Asp87Gly i Ser83Phe.
Dominirale su mutacije na 87. poziciji i to Asp87Asn supstitucija. Nisu nađeni dokazi o
klonalnom širenju sojeva rezistentnih na nalidiksičnu kiselinu. Rezistencija na
fluorohinolone nije otkrivena. Dokazana je smanjena osetljivost na fluorohinolone kod
S. Enteritidis rezistentnih na nalidiksičnu kiselinu. Kod drugih serotipova salmonela
rezistencija na nalidiksičnu kiselinu i udruženost sa više markera rezistencije bila je
učestalija nego kod S. Enteritidis, naročito kod S. Hadar. Rezistencija na ampicilin i
nalidiksičnu kiselinu bile su najčešće kod salmonela bez obzira na serotip.
Diskriminativna moć i jednostavnost RAPD-PCR metode sa četiri prajmera udružene sa
rezistotipizacijom preporučuju ih kao efikasan sistem tipizacije prilikom nadzora nad
kretanjem salmonela u humanoj i životinjskoj populaciji. Ispitivanje rezistencije na
antibiotike, a naročito na hinolone kod salmonela neophodno je u cilju upozoravanja
kliničara na terapijske rizike, a sa epidemiološkog aspekta, radi detekcije pojave i širenja opasnih sojeva.
Salmonelloses are among most significant zoonoses in the world. Since people are most
often infected by consumption of food of animal origin, surveillance of salmonella is
necessary in every stage of food production from farm to fork. Emergence of resistance
to quinolones among salmonella is a significant public health problem, considering
implications on the treatment of humans and animals. The aims of the investigation
were to analyze the possibility of fast and efficient typing of Salmonella enterica
subspecies enterica serotype Enteritidis (S. Enteritidis) as the most frequent serotype in
humans and to investigate frequency and molecular mechanisms determining resistance
to quinolones in salmonella. In a collection of S. Enteritidis isolates originating from
humans, poultry and marketed poultry products and eggs, a combination of RAPD-PCR
typing with four primers, resistotyping and polymorphism of mutations in quinolone
resistance determining region (QRDR) of gyrA gene revealed 22 ...genetic groups with
discrimination index of 0.828. All isolates were closely related and typing has proved
random distribution of types in all three categories of isolates, ie. circulation of strains
through subsequent stages of food chain. RAPD-PCR typing succesfully discriminated
epidemic strain among 3 S. Enteritidis isolates from one fast food restaurant. Analysis
of samples from one biscuit factory showed contamination with at least four strains of S.
Enteritidis and strong connection of serotype Enteritidis with eggs as a source of
contamination. Analysis of larger collection of isolates from food and humans in
Southern Bačka county in a six-year period revealed low frequency of resistance of S.
Enteritidis to antibiotics, rare occurence of multiple resistance to antibiotics and low
frequency of resistance to quinolones (2.9%). Three types of mutations determining
resistance to quinolones in QRDR were discovered: Asp87Asn, Asp87Gly and
Ser83Phe. Mutations at position 87 are dominant, with Asp87Asn as the most frequent.
There was no evidence of clonal spread of strains resistant to quinolones. Resistance to
fluoroquinolones was not detected. Reduced susceptibility to fluoroquinolones among S.
Enteritidis resistant to nalidixic acid was proved. Resistance to nalidixic acid and
association with multiple antibiotic resistance were more common among other
serotypes of salmonella, especially in S. Hadar, than among S. Enteritidis. Resistance to
ampicillin and nalidixic acid were the most common in all investigated salmonella
serotypes. Discriminative power and simplicity of RAPD-PCR method with four
primers together with resistotyping recommend them as the efficient typing system for
monitoring of salmonella in human and animal population. Investigation of resistance to
antibiotics, especially to quinolones among salmonella is essential for alerting clinicians
for therapy risks, and from epidemiological aspect, for detection of emergence and
spread of dangerous strains.
Faculty:
Универзитет у Београду, Биолошки факултетDate:
14-06-2012Projects:
- Genes and molecular mechanisms promoting probiotic activity of lactic acid bacteria from Western Balkan (RS-173019)