Ispitivanje uloge kalcijumovih kanala T-tipa u animalnom modelu postincinzionog bola
Investigation of the role of T-type calcium channels in an animal model of postincisional pain
Author
Joksimović, Sonja
Mentor
Stepanović-Petrović, Radica
Committee members
Todorović, SlobodanVučković, Sonja
Tomić, Maja

Micov, Ana

Metadata
Show full item recordAbstract
Svrha studije: T-tip kalcijumovih kanala (T-kanal) je uključen u regulaciju
neuronske ekscitabilnosti kako u fiziološkim, tako i u patološkim uslovima, kao što
su epilepsija i hronični bol. Poznato je da antagonisti T-kanala, uključujući i
neurosteroide i njihove sintetske analoge, ublažavaju neuropatski bol. Ipak, uloga Tkanala
nije ispitana u akutnom hirurškom modelu bola. Stoga je cilj našeg rada bio
da se ispita: 1) pojava hiperekscitabilnosti senzornih neurona spinalnih gangliona i
promene u biofizičkim karakteristikama T-kanala u postincizionom modelu bola, 2)
antinociceptivni efekat antagonista T-kanala (TTA-P2, epipregnanolona i njegovog
sintetskog analoga 3β-OH) u postincizionom modelu bola, 3) uticaj
antinociceptivnih doza antagonista T-kanala na motornu spretnost
eksperimentalnih životinja.
Metode: Kao model postoperativnog bola korišćen je postincizioni model bola u
miševa i pacova. U ovom modelu bola hiperalgezija je merena u testovima termičke
i mehaničke nocicepcije. In ...vivo ispitivanje uloge T-kanala u razvoju nocicepcije u
postincizionom modelu bola izvršeno je u miševa kod kojih je globalno obrisan gen
za CaV3.2 kalcijumov kanal (CaV3.2 KO), kao i u normalnih miševa (WT). Svi in vitro
eksperimenti u ovom modelu bola izvršeni su na telima disociranih senzornih
neurona spinalnih gangliona. Promene u ekscitabilnosti, uticaj T-kanala na
hiperekscitabilnost senzornih neurona, kao i promene u biofizičkim
karakteristikama T-kanala su ispitane elektrofiziološkom metodom na celim
ćelijama. qRT-PCR, imunoblot i imunohistohemijska metoda su korišćene za
ispitivanje promena u ćelijskoj ekspresiji T-kanala. Uticaj post-translacionih
modifikacija na funkcionalnost T-kanala ispitan je primenom metode imunoblotova
u cilju utvrđivanja promena u ekspresiji USP5 enzima, zaduženog za
deubikvitinaciju CaV3.2 podtipa T-kanala. Uloga USP5 enzima ispitana je u
bihejvioralnim testovima na pacovima i miševima kod kojih je privremeno sprečena
produkcija USP5 enzima primenom shRNK-USP5 pre sprovođenja incizije...