Ispitivanje biomarkera homeostaze holesterola i metabolizma vitamina D kod pacijenata sa kolorektalnim karcinomom
Assessment of biomarkers of cholesterol homeostasis and vitamin D metabolism in patients with colorectal cancer
Докторанд
Vladimirov, SandraМентор
Spasojević-Kalimanovska, VesnaЧланови комисије
Zeljković, AleksandraJelić-Ivanović, Zorana
Trifunović, Bratislav
Метаподаци
Приказ свих података о дисертацијиСажетак
Kolorektalni karcinom (CRC) je maligno oboljenje sa visokom prevalencijom u
razvijenim zemljama. Holesterol poseduje mnogobrojne funkcije, te se pretpostavlja da
ima ulogu i u procesima maligne transformacije i proliferacije. Procena efikasnosti procesa
sinteze i apsorpcije holesterola, određivanjem cirkulišućih nivoa neholesterolskih sterola
(NHS), može pružiti značajne podatke o metabolizmu holesterola, kao i njegovom uticaju
na status drugih biomolekula (vitamin D, steroidni hormoni). Ciljevi ovog istraživanja bili
su uvođenje i validacija metoda tečne hromatografije sa tandem masenom detekcijom
(HPLC-MS/MS) za kvantifikaciju markera sinteze (dezmosterol i latosterol) i apsorpcije
holesterola (kampesterol, β-sitosterol) u serumu i izolovanoj serumskoj frakciji
lipoproteina visoke gustine (HDL), kao i razvoj i validacija metode za kvantifikaciju
prekursora (7-dehidroholesterol, 7-DHC) i metabolita vitamina D (25(OH)D3,
24,25(OH)2D3) u serumu. Osim toga, ispitivali smo i status marker...a sinteze i apsorpcije
holesterola, kao i metabolizma vitamina D kod osoba sa CRC, i nastojali da utvrdimo
povezanost između metabolizma ovih jedinjenja, kao i da procenimo njihov prediktivni
potencijal za CRC.
U istraživanju je učestvovao 101 pacijent sa dijagnozom CRC i 114 zdravih
ispitanika. Pacijenti su podeljeni prema patološkim karakteristikama na sledeće grupe:
karcinom kolona (CA kolona) i karcinom rektuma (CA rektuma); gradus I i objedinjeni
gradusi II i III; stadijumi A i B, te stadijumi C i D. Koncentracije NHS u serumu i HDL
frakciji, kao i koncentracije parametara statusa vitamina D u serumu, određivani su HPLCMS/
MS metodama. Na osnovu koncentracija NHS u serumu i HDL frakciji, izračunati su
različiti indeksi homeostaze holesterola, dok je odnos metabolita vitamina D (VDMR)
izračunat na osnovu koncentracija 25(OH)D3 i 24,25(OH)2D3 u serumu.
Rezultati studije su pokazali da je holesterol glavni interferent prilikom određivanja
NHS, pa je u tom smislu izvršena priprema odgovarajućeg matriksa za kvantitativnu
analizu. Varijacije unutar serije su bile 4.7-10.3% za NHS u serumu i 3.6-13.6% za NHS u
HDL frakciji, a između serija 4.6-9.5% za NHS u serumu i 2.5–9.8% za NHS u HDL
frakciji. Studije prinosa analita su pokazale zadovoljavajuće rezultate: 89.8–113.1% za
NHS u serumu i 85.3–95.8% za NHS i HDL frakciji. Pacijenti su imali značajno niže
koncentracije NHS u serumu (p<0,001, za sve) i u HDL frakciji (p<0,001 za dezmosterol i
β-sitosterol, p<0,005 za kampesterol, p<0,05 za latosterol)...
Colorectal cancer (CRC) is a malignancy highly prevalent in developed countries.
Cholesterol is a biomolecule with multiple functions and suspected important role in
malignant transformation and proliferation. Assessing the efficiency of cholesterol
synthesis and absorption processes, by determining circulating levels of non-cholesterol
sterols (NCS), can provide significant data on cholesterol metabolism as well as its effect
on other biomolecules (vitamin D, steroid hormones). The objectives of this study were to
introduce and validate liquid chromatography - tandem mass detection (HPLC-MS/MS)
methods for quantification of cholesterol synthesis (desmosterol and lathosterol) and
cholesterol absorption (campesterol, β-sitosterol) markers in serum and serum high density
lipoprotein fraction (HDL), as well as the method for quantification of vitamin D status
parameters (7-dehydrocholesterol (7-DHC), 25(OH)D3, 24,25(OH)2D3). In addition, we
examined the status of cholesterol synthesis and... absorption markers, as well as vitamin D
metabolites in individuals with CRC, and explored the association between these two
metabolic pathways, as well as evaluated their predictive potential for CRC.
The study involved 101 patients with CRC diagnosis and 114 healthy subjects.
Patients were divided according to pathological characteristics into the following groups:
colon cancer (colon CA) and rectal cancer (rectal CA); grade I, and grade II and III
combined; stages A and B and stages C and D. NCS concentrations in serum and HDL
fraction, as well as concentrations of serum vitamin D status parameters, were determined
by HPLC-MS/MS. Based on NCS concentrations in serum and HDL fraction, different
cholesterol homeostasis indices were calculated. Vitamin D metabolite ratio (VDMR) was
calculated based on serum 25(OH)D3 and 24,25(OH)2D3 concentrations.
The study results showed that cholesterol was the main interferent in the
determination of NCS, and in this respect, the appropriate matrix for quantitative analysis
was prepared. Within-series variations were 4.7-10.3% for serum NHS and 3.6-13.6% for
NCS in HDL fraction, whereas between series variations were 4.6-9.5% for serum NHS
and 2.5-9.8% for NCS in HDL fraction. Recovery study has shown satisfactory results:
89.8–113.1% for serum NCS and 85.3–95.8% for NHS and HDL fraction.
Patients had significantly lower NCS concentrations (p<0.001, for all) in serum and
in the HDL fraction (p<0.001 for desmosterol and β-sitosterol, p<0.005 for campesterol,
p<0.05 for latosterol)...
Факултет:
Универзитет у Београду, Фармацеутски факултетДатум одбране:
17-12-2019Пројекти:
- Интерактивна улога дислипидемије, оксидативног стреса и инфламације у атеросклерози и другим болестима: генетички и биохемијски маркери (RS-MESTD-Basic Research (BR or ON)-175035)