Biomarkeri inflamacije i ekstracelularne vezikule kao prediktori venske tromboembolije kod pacijenata sa limfomom
Inflammatory biomarkers and extracellular vesicles as predictors of venous thromboembolism in lymphoma patients
Докторанд
Otašević, VladimirМентор
Antić, DarkoЧланови комисије
Mihaljević, BiljanaBila, Jelena
Đurđević, Predrag
Метаподаци
Приказ свих података о дисертацијиСажетак
Limfomi predstavljaju vrlo heterogenu grupu neoplazmi, čija se biološka raznolikost ogleda u
različitim mehanizmima napredovanja bolesti i razvoja komplikacija. Jedna od komplikacija koja
izaziva značajan morbiditet i mortalitet kod pacijenata sa malignitetima je venska tromboembolija
(VTE). Pacijenti sa malignitetom imaju do 7 puta veći rizik za razvoj tromboze u odnosu na opštu
populaciju. Specifična patofiziološka karakteristika limfoma je imunološka disregulacija, koja je usko
povezana sa aktivacijom inflamacije. Klasični indikatori nivoa inflamacije su broj leukocita i
standardizovani reaktanti akutne faze: C-reaktivni protein (CRP), brzina sedimentacije eritrocita
(ESR) i fibrinogen. Međutim, danas postoji značajan broj novih markera sistemske inflamacije poput
odnosa neutrofila i limfocita (neutrophil-to-lymphocyte ratio, NLR) i odnosa trombocita i limfocita
(platelet-to-lymphocyte ratio, PLR). Ekstracelularne vezikule (EV) predstavljaju generički termin za
formacije koje se pri...rodno oslobađaju iz ćelije, koje su ograničene lipidnim dvoslojem i koje se ne
mogu replicirati (tj. ne sadrže funkcionalno jedro). EV imaju vrlo sofisticiranu ulogu u brojnim
fiziološkim i patološkim procesima, gde se EV otpuštaju od strane različitih ćelija. Uloga EV u
trombozi povezanoj sa tumorom (cancer-associated thrombosis, CAT) ispitivana je u animalnim
modelima i kod ljudi. Pored toga, EV su povezane sa stanjima kako akutne tako i hronične
inflamacije, a često su i „nosači“ različitih molekula od kojih pojedini imaju protrombotički
potencijal. S obzirom na sve navedeno, ciljevi istraživanja bili su ispitivanje povezanosti biomarkera
inflamacije i razvoja VTE kod pacijenata sa limfomom koji su lečeni (imuno)hemioterapijom,
ispitivanje povezanosti VTE sa tipom terapijskog lečenja i odgovora na terapiju kod pacijenata sa
limfomom. Sledeći cilj je bio karakterizacija profila EV kod pacijenata sa difuznim B-
krupnoćelijskim limfomom (DBKL), ispitivanje povezanosti EV sa VTE kod pacijenata sa DBKL,
ispitivanje testa ukupnog hemostaznog potencijala (overall hemostasis potential, OHP) i povezanosti
sa VTE kod pacijenata sa DBKL.
Metodologija: U prvom delu istraživanja sprovedena je retrospektivna kohortna studija, u koju je
uključeno 706 novodijagnostikovanih i relapsirajućih pacijenata sa limfomom koji su lečeni u Klinici
za hematologiju, Univerzitetskog kliničkog centra Srbije. Prikupljeni su podaci o svim VTE kod
pacijenata sa novodijagnostikovanim limfomom ili relapsom bolesti. NLR i PLR su računati
korišćenjem parametara kompletne krvne slike sa diferencijalnom leukocitarnom formulom.
Analizirani su sledeći biohemijski parametri: ESR, CRP, laktat dehidrogenaza (LDH), fibrinogen,
ukupni proteini (TP), albumin. Drugi deo istraživanja predstavlja prospektivnu kohortnu studiju, koja
je uključila 62 pacijenta sa dijagnozom DBKL i sprovedeno je u kolaboraciji sa Univerzitetskom
bolnicom Karolinska, Služba koagulacije i kliničke hemije, Odeljenje za molekularnu medicinu i
hirurgiju, Institut Karolinska i klinička hemija, medicinska dijagnostika Karolinska. Ispitivanje EV
je sprovedeno korišćenjem protočne citometrije. Korišćen je sledeći panel markera: Annexin V za
fosfatidilserin (PS), CD42b/CD61 za EV porekla trombocita (platelet-derived extracellular vesicles,
PEV), CD142 za tkivni faktor (TF), CD19, CD20 i CD45 za DBKL/B-ćelijsku populaciju,
CD62P/CD62E za P-selektin odnosno E-selektin. Za identifikaciju EV korišćen je specifičan gejting
algoritam. EV su definisane kao vezikule veličine ≤1,0 μm i pozitivne na Annexin V. Za poređenje
EV kod pacijenata sa DBKL, formirana je kontrolna grupa od 5 zdravih volontera...
Lymphomas represent a very heterogeneous group of neoplasms, whose biological
diversity is reflected by different mechanisms of disease progression and development of
complications. One of the complications that causes significant morbidity and mortality in patients
with malignancies is venous thromboembolism (VTE). Patients with malignancy have up to 7-times
higher risk of developing thrombosis compared to the general population. A specific
pathophysiological characteristic of lymphoma is immune dysregulation, which is closely related to
the activation of inflammation. Inflammation has been classically assessed by white blood cell
(WBC) count and standardized acute phase reactants including C-reactive protein (CRP), erythrocyte
sedimentation rate (ESR), and fibrinogen level. However, today there are a significant number of new
markers of systemic inflammation such as neutrophil-to-lymphocyte ratio (NLR) and platelet-to-
lymphocyte ratio (PLR). Extracellular vesicles (EVs) are a generi...c term for formations that are
naturally released from cells. They are composed of a lipid bilayer and cannot replicate (i.e., do not
contain a functional nucleus). EVs have a very sophisticated role in numerous physiological and
pathological processes, where EVs are released by various cells. The role of EVs in cancer-associated
thrombosis (CAT) has been investigated in both animal models and in humans. In addition, EVs are
associated with conditions of both acute and chronic inflammation, and are often "carriers" of various
molecules which possess prothrombotic potential. In view of all the above, the research aims were to
examine the association between the biomarkers of inflammation and the development of VTE in
patients with lymphoma treated with (immuno)chemotherapy, to examine the association between
VTE development with the type of therapeutic treatment and response to therapy in patients with
lymphoma. The next objective was to characterize the profile of EVs in patients with diffuse large B-
cell lymphoma (DLBCL), to examine the association of EVs with VTE in patients with DLBCL, to
examine the overall hemostasis potential (OHP) test and the association with VTE in patients with
DLBCL.
Methodology: In the first part of the research, a retrospective cohort study was conducted, which
included 706 newly diagnosed and relapsed patients with lymphoma, who were treated at Clinic for
Hematology, University Clinical Center of Serbia. Data were collected for all VTE events in patients
with newly diagnosed lymphoma or relapsed disease. NLR and PLR were calculated using parameters
of complete blood count with differential leukocyte formula. The following biochemical parameters
were analyzed: ESR, CRP, lactate dehydrogenase (LDH), fibrinogen, total proteins (TP), albumin.
The second part of the research was the prospective cohort study, which included 62 patients
diagnosed with DLBCL, and was conducted in collaboration with Karolinska University Hospital,
Coagulation and Clinical Chemistry Service, Department of Molecular Medicine and Surgery,
Karolinska Institute and Clinical Chemistry, Karolinska Medical Diagnostics. The EVs assay was
performed using flow cytometry. The following panel of markers was used: Annexin V for
phosphatidylserine (PS), CD42b/CD61 for platelet-derived extracellular vesicles (PEVs), CD142 for
tissue factor (TF), CD19, CD20 and CD45 for DLBCL/B-cell population, CD62P/CD62E for P-
selectin or E-selectin. A specific gating algorithm was used to identify EVs. EVs were defined as
vesicles ≤1.0 μm in size and positive for Annexin V. To compare EVs in DLBCL patients, a control
group of 5 healthy volunteers was formed...