Unapređenje dijagnostičkih reagenasa za alergiju na bananu

Abstract

Banana je voće koje se veoma često koristi u ishrani širom sveta. Predstavlja jednu od prvih čvrstih namirnica koje se uvode u ishranu kod novorođenčadi, kao i jednu od uobičajnih namirnica u ishrani hospitalizovanih pacijenata. Prijatnog je ukusa i lake svarljivosti, i bogata je nutrijentima. Ipak, pored svih dobrih strana korišćenja banane u ishrani, ona može biti uzročnik netolerancije i alergijske reakcije. Alergijska reakcija na bananu je u većini slučajeva praćena pojavom blagih lokalnih simptoma, međutim u retkim slučajevima dolazi i do anafilaktičke reakcije. Dijagnostički reagensi koji se rutinski primenjuju u kliničkoj dijagnostici za alergiju na bananu su se u praksi pokazali kao nepouzdani. Kao pokazatelj važnosti upotrebe pouzdanih dijagnostičkih reagenasa opisani su slučajevi anafilaktičke reakcije nakon konzumiranja banane, gde je pokazano da komercijalno dostupni reagensi nisu dovoljno osetljivi da ukažu na prisustvo specifičnih IgE antitela, odnosno da postoji razvijena alergija na bananu. U cilju unapređenja dijagostičkih reagenasa za alergiju na bananu u ovom radu je optimizovan postupak za prečišćavanje tri važna alergena iz banana, označena kao Mus a 2, Mus a 4 i Mus a 5. Dobijeni pojedinačni dijagnostički reagensi za alergiju na bananu su omogućili detekciju specifičnog IgE-a kod alergičnih osoba i pokazali su se pouzdanijim u odnosu na komercijanli alergenski ekstrakt. U literaturi, kao i u rezultatima naših istraživanja, je pokazano da osim do sada registrovanih alergena iz banane (WHO/IUIS baza podataka) postoji još IgE reaktivnih proteina banane koji bi mogli da se koriste radi unapređenja dijagnostifikovanja alergije na ovaj alergeni izvor. Upotrebom kombinatornih biblioteka peptidnih liganada (CPLL) razvijen je 2D imunoblot proteina iz ekstrakta banane. Detektovani su IgE reaktivni proteini banane, među kojima su i neki koji do sada nisu registrovani kao alergeni. Identifikacija proteina sa 2D mape je urađena tehnikom određivanja “proteinskog otiska prsta" (PMF). Među IgE reaktivnim proteinima banane identifikovana je i katalaza, koja je proizvedena rekombinantnom DNK tehnologijom i okarakterisana kao novi alergen banane...