Истовремено одређивање охратоксина А и остатaка пестицида у грожђу и вину LC-MS/MS техником

Abstract

Развијена је брза, селективна и осетљива течно-хроматографска метода са масеном спектрометријом (LC-MS/MS) за истовремено квантитативно одређивање остатака 41 активнe супстанцe пестицида и охратоксина А (ОТА) у грожђу и вину. Због повећања осетљивости масеног спектрометра за испитиване аналите постављена мултирезидуална метода (MRM) је пребачена у временски сегментисану методу, тзв. методу у динамичком моду (dMRM). Eкстракцијa и пречишћавање аналита из узорака грожђа и вина су рађене модификованом Quick Easy Cheap Effective Rugged and Safe (QuEChERS) методом. За анализу ОТА ацетонитрилни екстракт је директно анализиран LC-MS/MS техником, док је пречишћавање екстракта за анализу остатака рађено помоћу колона за дисперзију на чврстој фази за пигментисане узорке (црно грожђе и црвено вино) и за воће и поврће (бело грожђе и бело вино). За детекцију ОТА услови масеног спектрометра су оптимизовани у циљу повећања селективности избором јона са најосетљивијим одговором (m/z 404  239 и m/z 404  221) за квантификацију и идентификацију. За детекцију активних супстанци пестицида аквизициони параметри масеног спектрометра, SRM прелази, фрагментационе енергије и колизионе енергије су преузете из базе података. У циљу развоја методе испитани су параметри линеарност одговора детектора, граница детекције (LOD), граница мерења (LOQ), матрикс ефекат, тачност, прецизност и поузданост, а добијене вредности су упоређене са критеријумима Уредбе 401/2006 за ОТА и SANTE/11813/2017 документа за активне супстанце пестицида. Линеарност методе за остатаке у грожђу и вину је испитивана у мобилној фази и матриксима узорака (0,005 до 0,500 mg/kg) и методом стандардног додатка (0,010 - 0,200 mg/kg)...

A fast, selective and sensitive reversed-phased liquid chromatography with tandem mass spectrometry (LC–MS/MS) method was developed and validated for simultaneous quantification of 41 pesticide residues and ochratoxin A (ОТА) in grapes and wine. For increasing sensitivity of mass spectrometer multiple reaction monitoring (MRM) was transferred into time segmented method, dynamic multiple reaction monitoring (dMRM). Grape and wine extraction and purification for both, pesticide residues and OTA, were performed with a modified Quick Easy Cheap Effective Rugged and Safe (QuEChERS) method. For OTA LC-MS/MS analysis acetonitrile extract was directly injected into system, and for pesticide analysis extracts were purified with dispersive solid phase extraction for pigmented samples (black grapes and red wine) and for fruits and vegetables (white grapes and wine). MS/MS conditions were optimized in order to increase selectivity, selecting the corresponding product ions (precursor-to-fragment m/z 404 → 239 and m/z 404 → m/z 221) for quantification and identification. For pesticide residues, MS/MS aquisition parameters, SRM transitions, fragment and colision energies, from database were used. For method validation, the performance of the method was assessed and compared with the European Commission (EC) Regulations 401/2006 for OTA and with the SANTE/11813/2017 document for pesticide residues, by studying the linearity, limit of detection (LOD), limit of quantification (LOQ), matrix effect, accuracy and precision. Linearity for quantification pesticide residues in grapes and wine was performed in mobile phase and in sample matrixes (0.005 – 0.500 mg/kg) and by standard addition (0.010 – 0.200 mg/kg). Correlation coefficients for most pesticides, in all four matrixes, were over 0.99. Linearity for OTA quantification in grapes was performed in acetonitrile and in the sample matrixes (0.001 – 0.050 μg/ml) and in acetonitrile and in wine matrixes (0.0005 – 0.010 μg/ml).