Ekspresija gena i proteina koji regulišu autofagiju u mononuklearnim ćelijama periferne krvi pacijenata sa multiplom sklerozom

Abstract

Uvod: Multipla skleroza (MS) je hronična inflamatorna bolest centralnog nervnog sistema (CNS) u kojoj infiltracija limfocitima dovodi do oštećenja mijelina i aksona. Autofagija, proces kontrolisane auto-digestije koji reguliše homeostazu ćelije, važan je u urođenoj i adaptivnoj imunosti. Uloga autofagije nije do sada detaljno izučavana u različitim populacijama limfocita u MS. Ciljevi istraživanja: Ispitati ekspresiju gena za regulatore autofagije (ATG7, ATG10, ATG5, ATG4B, ATG3, ATG13, ATG8A, ATG14, SQSTM1, BCL2, ULK1, BNIP3, FOXO1, FOXO3, VPS34, BECN1, ATF4) i proinflamatorne citokine (TNF, IFN-γ, IL-17 i GM-CSF), kao i aktivnost autofagije u mononuklearnim ćelijama periferne krvi (MNĆPK) i različitim populacijama limfocita pacijenata sa MS i kontrolnih ispitanika. Pacijenti i metode: Naša studija je uključila novoobolele pacijente sa MS, dijagnostikovane prema McDonald-ovim kriterijumima (2001.), koji u trenutku uzimanja uzorka nisu bili uključeni ni u jedan terapijski protokol. Koristeći kvantitativni PCR u realnom vremenu ispitali smo ekspresiju gena koji regulišu autofagiju i ekspresiju gena za proinflamatorne citokine u MNĆPK i CD3+CD4+ T-limfocitima, CD3+CD4- Tlimfocitima i CD3-CD19+B-limfocitima pacijenata sa MS i kontrola. Takođe smo analizirali aktivnost bazalne autofagije imunoblot metodom u MNĆPK i CD3+CD4- Tlimfocitima ove dve grupe ispitanika. Rezultati: Nivoi iRNK i proteina ATG5, potrebnog za formiranje autofagozoma, bili su povišeni u CD4+ i CD4- T-limfocitima, ali ne i u B-limfocitima i MNĆPK pacijenata sa MS u poređenju sa kontrolnim ispitanicima. Ekspresija ostalih ispitivanih autofagnih gena i aktivnost autofagije nisu se značajno razlikovale u ovim grupama ispitanika. Nivoi ATG5 iRNK u CD4+ T-limfocitima pacijenata sa MS bili su u pozitivnoj korelaciji sa nivoma iRNK za proinflamatorni citokin - faktor nekroze tumora (TNF).Zaključak: Naši rezultati ukazuju da povišena ekspresija ATG5, nezavisno od autofagije, može biti povezana sa proinflamatornom ulogom T-limfocita u MS.